RIP1 活化对调控凋亡与程序性坏死至关重要，RIP1 活化的检测关键是 Ser166 位点磷酸化，然而 RIP1 pSer166 的 WB 条带却不容易压出来，快来看看 arigo 手把手教学，立马做出好看的 p-RIP1 条带。
RIP1 是什么?
RIP1 (又叫 RIPK1) 是死亡受体下游关键的激酶蛋白，介导细胞死亡与炎症反应。 RIP1 的功能依赖于翻译后修饰，Ser166 位点磷酸化为活化 RIP1 激酶活性必要的翻译后修饰。活化的 RIP1 可调控二种细胞死亡：程序性坏死及 RIP1 依赖的细胞凋亡。由于 RIP1 与多种疾病高度相关 (如自身免疫性疾病、炎症性疾病、神经退行性疾病…等)，因此开发靶向 RIP1 的抑制剂引起广泛兴趣，特别是用于相关疾病的治疗。
RIP1 pSer166 条带要好看
条件是：细胞培养要加 TSZ (TNF-α + Smac mimetics + zVAD)
RIP1 pSer166 作用于死亡受体下游，须加 TNF-α 激活死亡受体才能检测到磷酸化 RIP1。
当细胞受 TNF-α 刺激，比起 RIP1 磷酸化，更容易产生 RIP1 泛素化导致 RIP1 降解。因此，还要加 Smac mimetics 抑制剂，阻止 RIP1 泛素化。
TNF-α 诱发的细胞死亡以 Caspase-8 介导的凋亡为优先，而 Caspase-8 会切割 RIP1 使其降解 (从而抑制程序性坏死)。所以加 Caspase 抑制剂 zVAD-fmk 是必要的。
除了细胞要加 TSZ，裂解液则务必加入磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂，确保 WB 可做出 RIP1 pSer166 好看条带。
另外，WB 侦测 RIP1 pSer166 只适合细胞裂解液；用组织裂解液效果很差，不容易看清楚。若想在组织侦测 RIP1 pSer166，免疫组化较为理想。arigo 的 RIP1 pSer166 抗体 (ARG66476) 能做 ICC/IF、IHC-Fr、IHC-P、IP、WB，一支多用，性价比就是高。不只如此，还有 Necrosome (ARG30344) 及 Ripoptosome (ARG30350) 抗体组合包可深入研究凋亡和程序性坏死。
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Post time: 2024-10-24 10:03:26
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